Sobre SPR

Sobre SPR

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SOBRE SPR

 

Para realizar un experimento de SPR, el ligando se inmoviliza en el chip mientras que el analito se inyecta sobre la superficie. Cuando tiene lugar la interacción entre el analito y el ligando se produce un cambio en el índice de refracción sobre la superficie del chip que se monitoriza como señal de SPR en función del tiempo, dando lugar a un sensograma.

De los ajustes de la respuesta máxima de los sensogramas a diferentes concentraciones de analito se obtiene la constante de afinidad del complejo, KD.

También se puede obtener información cinética (kon y koff) mediante el ajuste de las curvas a diferentes modelos teóricos, por ejemplo: interacciones de tipo 1:1, 2:1, modelos heterogéneos para el ligando o el analito y reacción en dos estados.

SPR se basa en un fenómeno óptico complejo que tiene lugar en la interfase entre dos medios con índices de refracción diferentes (disolución y cristal). Cuando un haz de luz polarizada alcanza dicha interfase a un ángulo determinado parte de él se refleja completamente pero otra parte se absorbe y se transfiere a los electrones libres de la superficie del metal que forma la superficie del chip, de tal forma que se convierte en plasmones de superficie. Los plasmones crean un campo que se extiende al medio de menor índice de refracción dando lugar a una ‘onda evanescente’ que decae exponencialmente al aumentar la distancia desde la superficie. La profundidad de esta onda evanescente que se utiliza para realizar las medidas es de hasta los 300nm de la superficie.

Debido a que el campo evanescente penetra en la disolución, las condiciones para la resonancia son muy sensibles al índice de refracción de la misma. Así, cambios en la concentración del soluto sobre la superficie del sensor provocará cambios en el SPR. Cuando una molécula se inmoviliza sobre la superficie del sensor o cuando el analito se une a la molécula inmovilizada la concentración sobre la superficie aumenta dando lugar a un cambio en la señal de SPR. La respuesta medida es proporcional al cambio de masa del analito unido sobre la superficie del chip que para moléculas biológicas es independiente de su naturaleza.

 

 

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